蟾酥及其制劑的含量測定方法很多，如分光光度法、薄層掃描法、差示光度法、高效液相色譜法和氣相色譜法等。
分光光度法
稱取蟾酥適量，置索氏提取器中，加氯仿回流提取 5 小時，揮干氯仿。殘渣分為二份，一份以乙醇溶解定容；另一份加 4％ NaOH 溶液 2mL，并用乙醇稀釋至刻度，搖勻，室溫下放置 30 分鐘后于 360nm 分別測定兩份溶液的吸收度，計算△ A，由回歸方程計算含量。
取蟾酥約 0.5g，于 80℃干燥 2 小時，研成細粉，精密稱定，加海砂 5g，混勻，置索氏提取器中，加氯仿適量，提取4 小時，回收氯仿，殘留物加乙醇適量使溶解，濾過，濾液移至 100mL 量瓶中，用少量乙醇分數次洗滌濾器，洗滌液并入量瓶中并加乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取 lmL置 25mL 量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，在 299nm 波長處測定吸收度，按脂蟾毒配基 (C24H3204) 的吸收系數 E ；蘭為 154 計算，即得。
薄層掃描法
薄層掃描法應用較廣，常用硅膠 G 板，丙酮 - 氯仿 -環己烷展開系統，在 λS300nm，λR340nm 處進行反射式鋸齒掃描?？蓽y定脂蟾毒配基、華蟾毒精、蟾毒靈、蟾毒它靈、遠華蟾毒精及日蟾毒它靈等多種成分。
氣相色譜法
用氣相色譜法測定蟾酥及其制劑的樣品需進行適當的預處理，如將樣品提取液先經過柱層析或薄層層析后，方可進行氣相色譜測定，采用 FID 檢測器，內標法或外標法定量。
高效液相色譜法
蟾酥中含有的蟾蜍笛二烯類、強心甾烯蟾毒類和吲哚堿類成分，都具有紫外吸收，可用高效液相色譜法測定。如《中
國藥典》2005 年版蟾酥中華蟾酥毒基和脂蟾毒配基就是用高效液相色譜法測定。
