博落回Macleayacordata(Willd)R.Br.為罌粟科博落回屬植物。博落回含有多種異喹啉類生物堿，包括原阿片堿、別隱品堿、血根堿、白屈菜紅堿等活性成分[1]。博落回始載于《本草拾遺》，別號(hào)有號(hào)筒草、山大筒等，為多年生草本，在我國分布于安徽、江蘇、湖北、湖南、四川等省區(qū)。博落回具有消腫、解毒、殺蟲的功能，用于疔毒膿腫，惡瘡潰瘍，燙傷，頑癬等。現(xiàn)代藥理研究表明博落回具有抗菌、抗腫瘤、殺蟲殺蛆、止咳平喘、鎮(zhèn)痛、改善肝功能、增強(qiáng)機(jī)體免疫力等作用[2]。已有文獻(xiàn)報(bào)道采用HPLC法測定博落回果實(shí)中血根堿和白屈菜紅堿的含量[3]。本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法同時(shí)測定博落回不同部位原阿片堿、別隱品堿的含量，為擴(kuò)大以獲得原阿片堿、別隱品堿為目的的博落回的中藥材市場提供參考。
1實(shí)驗(yàn)材料
1.1儀器
SHIMADZU20A高效液相色譜儀，LC-solution工作站；TP300超聲清洗儀(昆明市超聲儀器有限公司)。
1.2試藥
原阿片堿（中國藥品生物制品鑒定所，批號(hào)110853-200402）；別隱品堿（SIGMA，批號(hào)S450987）。乙腈為色譜純，其他試劑為分析純。博落回樣品采自湖南美可達(dá)生物資源有限公司種植園。
2方法與結(jié)果2.1色譜條件
色譜柱為Luna-C18柱（150mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：0.1%磷酸加三乙胺緩沖溶液(pH3.5)-乙腈（78∶22）；流速：0.8mL/min；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：5μL；檢測波長：284nm。
2.2對照品溶液的制備
精密稱取原阿片堿對照品5.24mg，別隱品堿對照品8.62mg，置于同一50mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。
2.3供試品溶液的制備
取干燥的博落回不同部位樣品1.00g，置于200mL圓底燒瓶中，加1%HCl水溶液-甲醇（1:1）200mL，稱定質(zhì)量，超聲1h，放冷，再稱定質(zhì)量，用1%HCl水溶液-甲醇（1∶1）補(bǔ)足損失的質(zhì)量，搖勻，經(jīng)0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。
2.4線性范圍考察
精密量取對照品溶液0.5、1.0、2.0、5.0、8.0、10.0mL，分別置于10mL量瓶中，加入甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取5μL進(jìn)行分析。以對照品的濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程。原阿片堿：Y=13790X－40090，r=0.9994，線性范圍：4.2～52μg/mL；別隱品堿：Y=8306X－2800，r=0.9999，線性范圍：6.9～86μg/mL。結(jié)果表明，原阿片堿、別隱品堿濃度與峰面積線性關(guān)系良好。
2.5精密度試驗(yàn)
取同一對照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定原阿片堿、別隱品堿峰面積，結(jié)果原阿片堿、別隱品堿峰面積的RSD分別為0.2%、0.3%。
2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)
取供試品溶液，自溶液配制后分別在0、2、4、8、12、24h各進(jìn)10μL，測得原阿片堿、別隱品堿峰面積的RSD分別為0.9%、0.6%。結(jié)果表明該樣品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。
2.7重復(fù)性試驗(yàn)
取同一部位博落回藥材（葉片，采集時(shí)間為2009年8月）粉末，按“2.3”項(xiàng)下方法制備6份供試品溶液，進(jìn)樣測定原阿片堿、別隱品堿的含量平均值為1.04%、0.68%，RSD分別為0.9%、0.6%。2.8加樣回收率試驗(yàn)
精密稱取6份原阿片堿含量為1.04%、別隱品堿含量為0.68%的博落回葉片樣品各0.5g，分別精密加入原阿片堿、別隱品堿對照品5.00mg和3.50mg。按“2.3”項(xiàng)下方法操作，在上述色譜條件下進(jìn)行測定，計(jì)算原阿片堿回收率為99.2%，RSD為1.8%；別隱品堿回收率為99.4%，RSD為0.9%。
2.9樣品測定
對不同部位的博落回樣品按“2.3”項(xiàng)下制成供試品溶液，進(jìn)行HPLC測定，記錄原阿片堿、別隱品堿峰面積，按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算2個(gè)生物堿含量，每組重復(fù)測3次】。
通過對原阿片堿、別隱品堿對照品溶液在200～800nm波長掃描，結(jié)果顯示原阿片堿、別隱品堿在284、288nm波長處有最大吸收，然后進(jìn)一步分析比較這2個(gè)波長下的圖譜，發(fā)現(xiàn)檢測波長為284nm時(shí)，原阿片堿和別隱品堿都有較大吸收，且基線較為平穩(wěn)，所以選擇284nm為檢測波長。
通過對比多種流動(dòng)相，如甲醇-水、甲醇-0.1%磷酸水、甲醇-0.1%磷酸加三乙胺緩沖溶液、乙腈-0.1%磷酸水、乙腈-0.1%磷酸加三乙胺緩沖溶液（pH3.5）流動(dòng)相。結(jié)果表明，用乙腈-0.1%磷酸加三乙胺緩沖溶液（pH3.5）做流動(dòng)相，基線穩(wěn)定，分離度好，峰形對稱，確定用乙腈-0.1%磷酸加三乙胺緩沖溶液（pH3.5）為流動(dòng)相。本實(shí)驗(yàn)建立了同時(shí)測定博落回不同部位中原阿片堿、別隱品堿的定量檢測方法，該方法簡便、準(zhǔn)確、靈敏度高。結(jié)果表明，博落回不同部位原阿片堿、別隱品堿含量有差異；其中博落回葉片中原阿片堿含量最高，根中別隱品堿含量最高，兩種生物堿之和在博落回不同部位中含量為：根＞果實(shí)＞葉＞莖。
